RNA干扰Livin基因的表达对膀胱癌细胞凋亡及细胞周期的影响研究

【摘要】凋亡抑制蛋白(InhibitorofApoptosisProtein,IAPs)是生物体内一类包含高度保守的BIR结构域的内源性抗细胞凋亡因子。Livin是近年来IAPs家族最新发现的成员,其分子结构包含1个BIR结构域和1个RING指结构域。Livin在正常成人组织中基本不表达,在许多肿瘤中高表达,被认为是肿瘤预后不良及药物抵抗的重要影响因素。研究表明Livin不但具有抗细胞凋亡作用,其分子结构包含的RING指结构域还赋予其泛素结合酶样活性,在细胞周期的调节上也有重要作用。国内关于Livin在膀胱癌中的表达情况,对其预后和化疗药物抗性的研究目前仍然较少。Livin的表达对于膀胱癌细胞凋亡及细胞周期的影响有待进一步研究。目的：(1)设计针对Livin的高效特异性siRNA并进行筛选,作为进一步实验研究的工具。(2)通过对人膀胱癌T24细胞系中Livin基因表达的RNA干扰,抑制Livin基因的表达,观察Livin基因表达下降对于膀胱癌细胞凋亡及细胞周期的影响。方法：(1)通过siRNA设计软件及siRNA数据库等工具设计出Livin基因特异性的siRNA。通过RT-PCR和Westernblot等方法观察其抑制Livin基因在人膀胱癌T24细胞系中表达的效率,筛选出具有高效性特异性的siRNA。(2)质粒转染高特异性siRNA干扰Livin基因的表达,通过双变量流式细胞仪计数,检测Livin基因表达下降对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响。(3)质粒转染高特异性siRNA干扰Livin基因的表达,用过流式细胞仪计数,检测抑制Livin基因表达下降对人膀胱癌T24细胞的细胞周期的影响。结果：1.Livin特异性siRNA的筛选使用siRNA设计软件和siRNA数据库获得3种siRNA,通过RT-PCR和Westernblot对每种siRNA在T24细胞中干扰效率进行检验,结果表明3种siRNA均能较显著的抑制Livin基因在T24细胞中的表达,其中1种能够显著的降低Livin基因的表达。2.Livin基因表达下调对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响双变量流式细胞计数显示,Livin基因表达下降,导致T24细胞自发性凋亡出现明显增高。3.Livin基因表达下调对人膀胱癌T24细胞周期的影响流式细胞计数显示Livin基因表达下降,导致T24细胞周期明显停滞于G2/M期。结论：1.Livin基因在T24细胞中的表达抑制,可以提高T24细胞自发性凋亡的发生率。2.Livin基因在T24细胞中的表达抑制,可以有效的抑制肿瘤细胞的增殖,减缓肿瘤的发展。
【作者】刘默睦；
【导师】赵晓昆；王荫槐；
【作者基本信息】中南大学，临床医学，2014，博士
【关键词】Livin；膀胱癌；凋亡；细胞周期；RNAi；

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